Pruebas bioquímicas
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
Prueba de Rojo de Metilo y Voges Proskauer (MR-VP)
Esta prueba se realiza para determinar la capacidad de un microorganismo de fermentar la glucosa con producción de ácido por la vía ácido mixta o con producción de un producto final neutro (acetoína) por la vía butanodiólica.
Fundamento
Este medio posee pluripeptona que le da los nutrientes a las bacterias desarrollarse en el medio, asimismo la glucosa será el hidrato de carbono fermentable. La glucosa es metabolizada por dos vías y de acuerdo a ellos serán los productos finales ácidos (ácido láctico, ácido acético, y ácido fórmico) o productos neutros (acetil metil carbinol). La diferencia en el metabolismo del microorganismo pude ser reconocido por la adición de un indicado de rojo de metilo y alfa naftol e hidróxido de potasio para la obtención de los productos ácidos o neutros.
Interpretación de resultados
Se examinan los tubos para revelar las pruebas bioquímicas.
- Prueba de rojo de metilo: se añaden unas gotas del indicador rojo de metilo al 0.04% y observar el medio (ver tabla 1 y figura 1).
- Prueba de Voges Proskauer: se adicionan 0.6 mL de alfa naftol al 5% en alcohol etílico y 0.2 mL de KOH al 40% a 2.5 mL de cultivo. Agitar el tubo y dejar reposar a temperatura ambiente de 10-15min. Observar color de la superficie (ver tabla 2 y figura 2).
Resultado
Para la identificación de Burkholderia cepacia de la prueba de MR-VP es:
- Rojo de metilo: Negativa.
- Voges Proskauer: Negativa.
Esta prueba sirve para determinar si un organismo es capaz de utilizar citrato como única fuente de carbono y compuestos amoniacales como única fuente de nitrógeno en su metabolismo, provocando una alcalinización del medio.
Fundamento
Utiliza el medio de cultivo al fosfato monoamónico como fuente de nitrógeno y citrato de sodio como fuente de carbono. Como indicador de pH se tiene al azul de bromotimol, que vira al color azul en medio alcalino. Es un medio de cultivo diferencias con base a los microorganismos que son capaces de utilizar al citrato como su única fuente de carbono y las sales de amonio como fuente de nitrógeno. Asimismo, el metabolismo del citrato puede suceder en aquellas bacterias que poseen citrato permeasa, a través del ácido tricarboxílico. El desdoblamiento del citrato va a provocar la producción de oxalacetato y piruvato, el cual el piruvato en un medio alcalino da paso a la producción de ácidos orgánicos que al ser utilizados como fuente de carbono nos da productos como carbonatos y bicarbonatos alcalino. He de ahí el cambio de color a azul, lo cual es un indicativo de la producción de citrato permeasa.
Interpretación de resultados
Positivo: crecimiento bacteriano con un intenso color azul en el pico de flauta.
Negativo: ausencia de crecimiento y permanencia del color verde del medio de cultivo (ver figura 3).
Resultado
Para la identificación de Burkholderia cepacia de la prueba de citrato es: POSITIVA.
(Britania, 2021)
Referencias bibliográficas
Britania. (2021). MR-VP Medio. Britanialab. https://www.britanialab.com/back/public/upload/productos/upl_6070751064820.pdf
Britania. (2021). Simmons Citrato Agar. Britanialab. https://www.britanialab.com/back/public/upload/productos/upl_607092758cfa8.pdf
La información es bastante clara y con las imágenes es mucho más fácil comprender un resultado positivo como uno negativo.
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