Pruebas bioquímicas

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

Prueba de Kligler

Es un medio de cultivo cuyo objetivo es determinar si el microorganismo es capaz de fermentar los hidratos de carbono y la producción de ácido sulfhídrico. 

Fundamento

En medio de cultivo tiene ingredientes como la peptona de carne y la tripteína, las cuales aportan los nutrientes adecuados para el desarrollo bacteriano. Otros de ellos son la lactosa y la glucosa que son los hidratos de carbono fermentables. Asimismo, el tiosulfato de sodio es el sustrato adecuado para producir el ácido sulfhídrico, el citrato de hierro y amonio. El rojo de fenol es el indicador de pH que posee este medio, también contiene cloruro de sodio quien se encarga de mantener el balance osmótico. 

Una vez establecido esto, en la fermentación de azucares se producen ácidos los cuales serán detectados por el indicador rojo de fenol, el cual vira al color amarillo en medio ácido. El tiosulfato de sodio se reducirá a sulfuro de hidrógeno el cual posteriormente reaccionará con una sal de hierro y producirá el sulfuro de hierro de color negro. 

Interpretación de resultados

Es necesario observar el color del medio de cultivo y la producción de gas como se puede ver en la tabla 1 y figura 1.

Tabla 1. Interpretación de los resultados del medio de Kligler
Superficie alcalina Profundidad ácida	Pico rojo Fondo amarillo	Solamente fermenta glucosa
Superficie ácida Profundidad ácida	Pico amarillo Fondo amarillo	Fermenta glucosa y lactosa
Superficie alcalina Profundidad alcalina	Pico rojo Fondo rojo	No es fermentador de azúcares
La presencia de burbujas o la ruptura del medio de cultivo indica que el microorganismo produce gas.
El ennegrecimiento del medio indica que el microorganismo produce ácido sulfhídrico

Figura 1. Interpretación de resultados de un medio de Kligler. Nota. Adaptado de Pruebas bioquímicas para la identificación bacteriana [Imagen], por Guerra-Martínez, S., Reyes-Blanco, M.T. & Atilano-Durán, M.G, 2016 de https://slideplayer.es/slide/10184611/ 

Resultado

Para la identificación de la bacteria Burkholderia cepacia los resultados después se la interpretación será: Negativo. Debido a que esta bacteria no fermenta a los azúcares y no produce sulfuro de hidrógeno.

(Britania, 2021).

Prueba de SIM

Está destinado a verificar la movilidad, producción de indol y de sulfuro de hidrógeno por los microorganismos.

Fundamento

El triptófano es un aminoácido que constituye a algunas peptonas, principalmente a la tripteína. Esta es metabolizada por algunas bacterias para formar indol, en el proceso intervienen unas enzimas denominadas triptofanasa. El indol se combina con el reactivo de Kovac's o el aldehído de Ehrlich para originar un compuesto de color rojo. El tiosulfato de sodio realizará la misma reacción que se describió en la prueba de Kligler. 

Interpretación de resultados

• Movilidad

Tabla 2. Interpretación de movilidad
Positivo	Presencia de turbidez o crecimiento más allá de la línea de siembra.
Negativo	Crecimiento solamente en la línea de siembra.

• Producción de SH2

Tabla 3. Interpretación de producción de SH2
Positivo	Ennegrecimiento del medio de cultivo a lo largo de la línea de siembra o en todo el medio.
Negativo	El medio permanece sin cambio de color.

• Prueba de indol

Tabla 4. Interpretación de prueba de indol
Positivo	Color rojo.
Negativo	El color del reactivo revelador permanece Incoloro-amarillento.

Figura 2. Prueba de SIM. Nota. Adaptado de SERIES DE IDENTIFICACIÓN BIOQUÍMICA

(UREA, CITRATO, LISINA, SIM Y TSI) [Imagen], por MDM, 2020 de https://mdmcientifica.com/wp-content/uploads/2021/03/IS-24-SERIES-DE-IDENTIFICACION-BIOQUIMICA.pdf

Resultado

Para la identificación de la bacteria Burkholderia cepacia los resultados después se la interpretación serán: 

Indol: Negativo. 

Producción de SH2: Negativo

Movilidad: Positivo

Porque esta bacteria es móvil, no produce sulfuro de hidrógeno y no se obtiene indol.

(Britania, 2021)

Prueba de LIA

Medio usado para la identificación de enterobacterias, en base a su capacidad para desaminar o descarboxilar la lisina y de producir sulfuro de hidrógeno.

Fundamento

La peptona y el extracto de levadura serán quienes aporten los nutrientes necesarios al medio para que la bacteria crezca. La lisina es el sustrato que detectará la presencia de las enzimas descarboxilasa y desaminasa , para la producción de ácido sulfhídrico los indicadores son el citrato de hierro y amonio, así como el tiosulfato de sodio. Y por último, el bromocresol es el indicador de pH.    
Los microorganismos fermentadores de glucosa van acidificar el medio y por lo tanto, tendrá una coloración de purpura a amarillo. Asimismo, el medio acidificado favorece la actividad enzimática descarboxilasa y metaboliza a la lisina en cadaverina, entonces al elevarse el pH del medio, este se tornará a un color púrpura o violeta. En el caso de los microorganismos fermentadores de glucosa que no tienen actividad lisina decarboxilasa, producen un viraje de la totalidad del medio de cultivo al color amarillo.

Interpretación de resultados

Tabla 5. Descarboxilación de la lisina
Positivo	Superficie alcalina Profundidad alcalina	Pico violeta Fondo violeta
Negativo	Superficie alcalina Profundidad ácida	Pico violeta Fondo amarillo

Tabla 6. Producción de SH2
Positivo	Ennegrecimiento del medio de cultivo (especialmente en el límite entre la superficie y profundidad).
Negativo	El medio de cultivo permanece sin cambio de color.

Figura 3. Prueba de LIA. Nota. Adaptado de Agar Lisina Hierro [Imagen], por López, A., 2017 de https://www.youtube.com/watch?v=lfxa7Xvgrog 

Resultados

En la bacteria de Burkholderia cepacia los resultados serán: 

• Lisina: Positiva
• SH2: Negativa

(Britania, 2021).

Referencias bibliográficas

Britania. (2021). Lisina Hierro Agar. Britanialab. https://www.britanialab.com/back/public/upload/productos/upl_6054e85d48c47.pdf

Britania. (2021). Kligler Hierro Agar. Britanialab. https://www.britanialab.com/back/public/upload/productos/upl_60706c3393e51.pdf

Britania. (2021). SIM Medio. Britanialab. https://www.britanialab.com/back/public/upload/productos/upl_6070922459b84.pdf